Efecto sobre el neurodesarrollo y neuroprotección en pez cebra de un extracto polifenólico de huesos de aceituna

Abstract

Objetivo: Determinar el efecto de un extracto polifenólico de hueso de oliva en el desarrollo del sistema nervioso y frente al daño inducido mediante la neurotoxina ácido kaínico, utilizando como modelo animal el pez cebra. Material y métodos: Se analiza el efecto del extracto a la máxima dosis tolerada (100 mg/ml de polifenoles) sobre la actividad colinérgica en larvas de pez cebra (72 horas post-fertilización). Se utilizan únicamente huevos fecundados sin anomalías. Se incuban 6 huevos/pocillo en microplaca de 24 pocillos en 2 ml de agua con DMSO (0,1%) a 26 ± 1º C: a) neurodesarrollo: agua (control) y con 100 mg/ml de extracto, como ensayo; b) neuroprotección: agua y ácido kaínico (100 μM) (control) y con 100 mg/ml de extracto (ensayo). Todas las incubaciones por triplicado. A las 72 h se examinan y verifica ausencia de anomalías. Las larvas se homogeneizan y en los sobrenadantes se cuantifica actividad acetilnolinesterasa y concentración proteínas. Resultados: La cantidad de proteína y apreciación morfológica es análoga en todos los ensayos, indicando mismo desarrollo. La acetilcolinesterasa en las larvas de pez, con el extracto polifenólico es del 162,2%(SD 44,2) respecto a controles (100% de actividad) (p < 0,01). Las larvas de pez tratadas con ácido kaínico y extracto polifenólico presentan el 140,1% (SD 22,0) de actividad, respecto a las incubadas únicamente con la neurotoxina (100%) (p < 0,05). Conclusión: Los polifenoles extraídos de los huesos de aceituna producen incremento de actividad colinérgica durante el neurodesarrollo larvario en el pez cebra y protección frente a la neurotoxina ácido kaínico.

Objective: To determine the effect of a polyphenolic extract from olive pit on the development of the nervous system as well as its effect on pain induced by the neurotoxin kainic acid, taking the zebrafish as the animal model. Material and methods: We analyse the effect of the extract at the maximum tolerated dose (100 mg/ml of polyphenols) on the cholinergic activity in zebrafish larvae (72 hours post-fertilization). Only fecundated eggs with no abnormalities are used. 6 eggs/bowl are incubated in a 24 bowls microplate in 2 ml of water with DMSO (0.1%) at 26 ± 1º C: a) neurodevelopment: water (control) and 100 mg/ml of extract, as an essay; b) neuroprotection: water and kainic acid (100 μM) (control) and 100 mg/ml of extract (essay). All incubations are in triplicate. After 72 h, incubations are examined and checked for any abnormalities. Larvae are homogenized and acetyl cholinesterase activity and protein concentration in supernatants is quantified. Results: The quantity of protein and the morphologic appreciation is similar in all the essays, showing a standard development. Acetyl cholinesterase in fish larvae, with the polyphenolic extract is 162.2% (SD 44.2) compared to controls (100% of activity) (p < 0.01). Fish larvae treated with kainic acid and polyphenolic acid show 140.1% (SD 22.0) of activity, compared to those only incubated with the neurotoxin (100%) (p < 0.05). Conclusion: Polyphenols extracted from olive pit produce an increase in the cholinergic activity during the larvae neurodevelopment in the zebrafish as well as protection against the neurotoxin kainic acid.