Estudio de los daños estructurales tras la inmovilización espermática previa a la microinyección intracitoplasmática de espermatozoides en sujetos teratozoospérmicos

Abstract

Objetivo: Describir y comparar las alteraciones ultraestructurales que puede provocar la inmovilización espermática previa a la microinyección intracitoplasmática de espermatozoides, así como los daños en el ADN y el estado del acrosoma en espermatozoides de sujetos teratozoospérmicos y normozoospérmicos. Material y métodos: Se utilizaron 15 muestras seminales procedentes de donantes normozoospérmicos y 20 muestras de pacientes teratozoospérmicos del Instituto Bernabeu de Alicante. Para el estudio con microscopia electrónica de transmisión se utilizaron ovocitos humanos como receptáculo de los espermatozoides. La fragmentación del ADN se valoró mediante la técnica TUNEL, y el estado del acrosoma, utilizando la lectina Pisum sativum conjugada con FITC. El análisis estadístico entre los diferentes grupos se realizó mediante un test ANOVA. Resultados: Los resultados mostraron que, tras la inmovilización, los espermatozoides procedentes tanto de sujetos normozoospérmicos como de teratozoospérmicos sufrieron las mismas alteraciones ultraestructurales a nivel de la membrana plasmática y acrosomal. Tras valorar la fragmentación de ADN mediante TUNEL observamos que en los espermatozoides inmovilizados el porcentaje de espermatozoides con ADN fragmentado era similar en ambos grupos (normozoospérmicos vs. teratozoospérmicos). En cambio, el porcentaje de espermatozoides con reacción acrosómica fue significativamente más elevado en los inmovilizados que en el grupo control, tanto en los sujetos normozoospérmicos como teratozoospérmicos. Conclusión: Los resultados de este estudio evidencian que los daños estructurales provocados por la inmovilización, en espermatozoides procedentes de sujetos normozoospérmicos y teratozoospérmicos, son independientes de la morfología espermática. Y además, dicho proceso no provoca fragmentación del ADN. Sin embargo, la inmovilización tanto en el grupo de los sujetos normozoospérmicos como teratozoospérmicos provoca una inducción mecánica de la reacción acrosómica.

Objective: To describe and compare the ultrastructural alterations, DNA fragmentation and acrosome status that could cause sperm immobilisation prior to intracytoplasmic sperm injection, in samples from normozoospermic and teratozoospermic males. Material and methods: For this study we used 15 sperm samples from consenting normozoospermic donors and 20 samples from teratozoospermic males, submitted for assisted reproduction at Instituto Bernabeu of Alicante. To assess the ultrastructural alterations induced by immobilisation, human oocytes were used as containers for spermatozoa and then observed by transmission electron microscopy. DNA fragmentation was assessed using TUNEL and acrosome status using fluorescein isothiocyanate-conjugated Pisum sativum agglutinin. The control group consisted of sperm without manipulation. Statistical analysis between groups was performed by ANOVA. Results: The results showed that immobilised spermatozoa presented the same damage in plasma and acrosomal membranes in the samples from both normozoospermic and teratozoospermic subjects. After assessing DNA fragmentation in the cells from normozoospermic and teratozoospermic patients by the TUNEL technique, we observed that the percentage of spermatozoa with DNA fragmentation did not increase in the immobilised group compared with the control group. However, the percentage of acrosome-reacted sperm was significantly greater in immobilised spermatozoa than in the control group in both normozoospermic and teratozoospermic males. Conclusion: The results of this study show that the structural damage caused by immobilisation in spermatozoa from teratozoospermic and normozoospermic males is independent of sperm morphology. In addition, the immobilisation does not cause DNA fragmentation. However, the percentage of acrosome-reacted sperm was greater in the immobilised group than in the control group, in both normozoospermic and teratozoospermic subjects.